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    助力核酸檢測?——新冠專題
    源葉生物 / 2021-11-12

     隨著秋冬時節來臨,新型冠狀病毒又掀起了一輪新的傳播

     11110—24時,31個?。ㄗ灾螀^、直轄市)和新疆生產建設兵團報告新增確診病例98例。其中境外輸入病例19例(上海6例,云南5例,黑龍江2例,廣東2例,內蒙古1例,浙江1例,福建1例,廣西1例);本土病例79例(遼寧52例,均在大連市;河南12例,其中鄭州市6例、周口市6例;北京6例,其中海淀區4例、朝陽區2例;黑龍江5例,均在黑河市;河北2例,均在辛集市;江西1例,在上饒市;云南1例,在德宏傣族景頗族自治州),含16例由無癥狀感染者轉為確診病例(河南11例,遼寧5例)。

    新型冠狀病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,2019-nCoV),簡稱“新冠肺炎”目前,對全球公共衛生安全構成了巨大威脅!

    什么是病毒?

    病毒(virus): 是由一個核酸分子(DNARNA)與蛋白質構成的非細胞形態,靠寄生生活的介于生命體及非生命體之間的有機物種,它既不是生物亦不是非生物,目前不把它歸于五界(原核生物、原生生物、真菌、植物和動物)之中。病毒可以感染幾乎所有具有細胞結構的生命體。一個保護性外殼包裹的一段DNA或者RNA,借由感染的機制,這些簡單的有機體可以利用宿主的細胞系統進行自我復制,但無法獨立生長和復制 。

    冠狀病毒在系統分類上屬套式病毒目(Nidovirales冠狀病毒科Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)。冠狀病毒屬的病毒是具囊膜envelope)、基因組為線性單股正鏈的RNA病毒,是自然界廣泛存在的一大類病毒。2019新型冠狀病毒SARS-CoV-2 [3]  ,引發新型冠狀病毒肺炎COVID-19 [4]  )是目前已知的第7種可以感染人的冠狀病毒,其遺傳物質為RNA; RNARNA之間重組率非常高,病毒出現變異正是由于這種高重組率。

     

    檢測原理

    核酸檢測的物質是病毒的核酸。核酸檢測是查找患者的呼吸道標本、血液或糞便中是否存在外來入侵的病毒的核酸,來確定是否被新冠病毒感染。因此一旦檢測為核酸“陽性”,即可證明患者體內有病毒存在。新冠病毒感染人體之后,首先會在呼吸道系統中進行繁殖,因此可以通過檢測痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判斷人體是否感染病毒。所以說,核酸檢測陽性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標準。

    核酸檢測( RT -PCR熒光法)是當前檢測“新冠肺炎” 的主要方法,其基本原理是:根據病毒的核酸序列設計特異性的引物用于擴增對應的核酸片段,同時高度特異性的TaqMan探針可與對應的核酸片段進行結合,并在Taq酶外切酶活性作用下發生水解,產生熒光信號,根據熒光信號與擴增循環數之間的關系可得到實時擴增曲線。標本處理前必須進行56°C 30min病毒滅活預處理,方可進行后續處理。目前各大商業公司試劑盒中以2019-nCoVRdRP基因(位于ORF 1ab讀碼框)、E基因和N基因為檢測對象,從而實現對2019-nCoV核酸的檢測。

    核酸診斷檢測,首先要進行樣本采集,病毒采樣管是檢測流程中最重要的環節之一。病毒采樣管的及時供應,也是疫情防控的重要保障。病毒采樣管最主要由拭子+采樣管+病毒保存液組成。

    檢測步驟:

    病毒保存液一方面直接裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解,另外一方面,又能讓病毒的蛋白變性,失去活性而“死掉”,不再有傳染性,提高運輸和檢測階段的安全性。

     

    廣泛使用的病毒保存液有兩種,一種是以運送培養基為基礎改良的病毒維持液,另一種則為核酸提取裂解液改良的保存液。

     

    病毒保存液中,用量最大的成分是胍鹽,核酸提取是指利用物理、化學等方法將核酸從樣品中分離出來的過程。分離得到高質量的核酸是分子生物學研究的關鍵步驟。鹽酸胍、異硫氰酸胍和蛋白酶K都具有使蛋白質變性的作用,在核酸提取中有廣泛的應用。

    鹽酸胍,CAS號:50-01-1,是一種白色結晶粉末。鹽酸胍是核酸酶的強抑制劑,但并不是強變性劑,它在核酸提取中的主要作用是使蛋白質變性并抑制酶活性。鹽酸胍能夠快速破壞細胞膜,使得蛋白質變性沉淀,從而讓核酸能夠擺脫蛋白質的纏繞。鹽酸胍的溶解能力和變性能力相對較強,但在酸性條件下易產生沉淀、可能對蛋白質離子交換色譜有干擾等缺點。

     異硫氰酸胍,CAS號:593-84-0,是一種白色結晶性粉末。異硫氰酸胍是一類強力的蛋白質變性劑,無RNA酶和DNA酶活性。在核酸提取中,異硫氰酸胍能夠迅速破碎細胞或病毒釋放核酸,抑制細胞釋放出的核酸酶,保證核酸一級結構的完整性。新型冠狀病毒是一種RNA病毒,各種RNA病毒的核酸由于自體降解和生物酶介導的降解,是較難穩定保存的生物分子。而異硫氰酸胍是一類強有力的蛋白質變性劑,且具有無RNA酶和DNA酶活性的特點。采樣管中加入異硫氰酸胍能夠破壞RNA酶的分子結構,使樣本中可能存在的核酸酶失活,起到穩定保存病毒樣本的作用。作為核酸裂解液的主要成分,異硫氰酸胍能迅速破碎病毒,使核蛋白與核酸迅速分離,同時抑制釋放出的核酸酶活性,保證核酸一級結構的完整性,提高核酸提取效率;

     

    目前,源葉生物可以提供主要相關原料如下:

     

    新冠病毒檢測及研究相關原料

    功能

    具體產品

    裂解RNA,蛋白滅活,促進PCR

      S30260    異硫氰酸胍593-84-0  99%

      S30259    鹽酸胍50-01-1AR,99%

      S11080    二硫代蘇糖醇3483-12-3BR,99%

      S15012   十二烷基硫酸鈉151-21-3

      S15011 十二烷基肌氨酸鈉 137-16-6 試劑級,95%

      S10085  蛋白酶K39450-01-630u/mg

    病毒生存需求

     S16001 三羥甲基氨基甲烷 77-86-1 AR,99.9%

      R20049  Hanks平衡鹽溶液(1×HBSS,含酚紅)   

      R20064 Earle's平衡鹽溶液(1×EBSS,無鈣鎂糖酚紅)

      S16013 N-(2-羥乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸) 7365-45-9 BR,99% HEPES

      R20069 HEPES溶液(1mol/L,pH6.8-8.0,非無菌)   

    穩定病毒蛋白

      S11022  D()-無水葡萄糖 50-99-7 AR,99%

      MP20001   胎牛血清   100ml 4

      S12012 牛血清白蛋白 9048-46-8 BR,98%

      S12018 人血白蛋白 70024-90-7 BR,96-99%

      R22760 牛血清白蛋白溶液(20% BSA)

      S12014 牛血清白蛋白(第五組份)9048-46-8BR,98%

    抑制細菌

      R22049 l 酚紅指示劑(6.8-8.0)    

      R20016 青霉素-鏈霉素混合溶液(100×雙抗)   

      S17024 慶大霉素硫酸鹽1405-41-0USP級,590u/mg

      R20013 硫酸慶大霉素溶液(Gentamycin Sulfate,50mg/ml)10ml

      R20017 青霉素-鏈霉素-慶大霉素混合溶液(100×三抗

      S17024 慶大霉素硫酸鹽 1405-41-0 USP級,590u/mg

      S17056 多粘菌素B硫酸鹽 1405-20-5 USP級,6000IU/mg

    金屬離子螯合劑

      S30032乙二胺四乙酸二鉀鹽 二水合物25102-12-9超純,99%

      S30026乙二胺四乙酸二鈉鹽6381-92-6AR,99%

      S30419 8-羥基喹啉148-24-3AR,99.5%(金屬離子的絡合劑和萃取劑)

    沉淀法提取RNA

      S11042 糖原BR,河蚌提取99%

      S18128 核糖核酸(酵母) 63231-63-0

    分解RNA

      S10068 核糖核酸酶(牛胰) 9001-99-4 高純,60u/mg

    熒光檢測

      S10118 Taq 9012-90-2 BR,2-5u/ul,99%

     

    更多詳情詳見官網:www.suntechgn.net

     

    源葉生物友情提示:時刻警惕,積極防護,戴口罩,勤洗手。

    上海源葉生物科技有限公司 

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